植物生理学通讯第46卷第4期,2010年4月399收稿2009-12-22修定2010-01-22资助国家重点基础研究发展规划项目(2005cb121106。*通讯作者(E-mail:dqxu@sippe.ac;Tel:021-********。叶绿素含量测定的简化舒展,张晓素,陈娟,陈根云,许大全*中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海200032提要:本文介绍一种避免称重、研磨、冲洗和过滤等繁琐步骤,仅将确定面积的叶片细丝用少量80%丙酮浸泡提取后便可比色计算的简便的测定叶绿素含量的方法。此法省时间、省溶剂,不受叶片含水量变化的干扰,适合于大批量叶片样品的测定,而且便于与以单位叶面积表示的光合速率联系起来分析实验结果。同时,指出一些可能影响测定结果的因素。关键词:叶绿素含量;叶绿素a/b;叶片鲜重;叶面积TheSimplificationofChlorophyllContentMeasurementSHUZhan,ZHANGXiao-Su,CHENJuan,CHENGen-Yun,XUDa-Quan*InstituteofPlantPhysiologyandEcology,ShanghaiInstitutesforBiologicalSciences,ChineseAcademyofSciences,Shanghai200032,ChinaAbstract:Asimplemethodofchlorophyllcontentmeasurementisintroducedinthepresentpaper.Namely,leaffilamentswithknownareaaresoakedin80%(V/Vacetoneuntilcolorofthefilamentschangedfromgreentowhite,andthenthesupernatantofextractistakenforlightabsorptionmeasurement.Thismethodelidessometime-consumingstepssuchasdeterminingofleaffreshweight,grinding,washing,filteringandsoon.Itnotonlycansavetimeandsolvent,andavoidinterferencebychangesinleafwatercontent,butalsoismoreconvenienttomeasurementoflargeamountsamples,andanalysisofmeasurementresultswithphotosyntheticrateonthebasisofleafarea.Moreover,somefactorsthatmayinfluencetheresultofchlorophyllcontentmeasurementarepointedout.Keywords:chlorophyllcontent;chlorophylla/b;leaffreshweight;leafarea叶绿素含量是反映植物特别是光合机构生理状况的一个基本指标,植物生理研究中经常涉及叶绿素含量的测定。但如何测定叶绿素含量,迄今尚未见到一篇简便方法的介绍。不少研究论文和实验教材(中国科学院上海植物生理研究所和上海市植物生理学会1999;侯福林2004;藤利荣和孟庆繁2008;李玲1999,2009中提到或介绍的测定方法一般都包括叶片称重、研磨、冲洗、过滤和定容(25mL或更多及稀释等繁琐步骤,既费时间,又费溶剂,不适于科学研究中大批量样品的测定,特别是以叶片鲜重表示的叶绿素含量,不仅容易受叶片含水量变化的干扰,给测定结果带来偏差,而且也不便于同以单位叶面积表示的光合速率联系起来分析两者的关系。针对叶绿素含量测定中比较普遍存在的问题(许大全2009,我们感到很有必要把自己多年来使用(例如,许大全和薛德林1985;Xu等1993;Chen等2005;Chen和Xu2006的简便方法介绍出来,以供参考。材料与方法1植物材料除特别指出的以外,本文报告的叶绿素测定结果全部来自田间生长的菠菜(SpinaciaoleraceaL.叶片。小麦(TriticumaestivumL.不同叶位叶片来自中国科学院山东禹城试验站小麦田(灌浆期。文内数据资料用Sigmaplot9.0进行差异显著水平分析。2基本步骤(1取样:用知道确切面积的模板或打孔器切取1cm2左右叶片(注意避开比较粗大的叶脉,切成长约5mm、宽约1mm的细丝。(2浸提:将叶片细丝投入含5mL80%丙酮的刻度试管中,封管口后于暗中提取至细丝完全变为白色为止(过夜即可。如果中间轻轻摇晃试管几DOI:10.13592/jki.ppj.2010.04.001植物生理学通讯第46卷第4期,2010年4月400次,则可以缩短提取时间。(3比色:为弥补可能由于溶剂挥发带来的损失,可用80%丙酮将上述提取液重新定容至5mL,然后将管内溶液轻轻倒入比色杯中,按照Arnon(1949方法用光波长分辨率较高的分光光度计(本文用UV-120型分光光度计,日本Shimadzu公司制造分别于663nm和645nm处读光密度(OD。(4计算:首先按Arnon(1949的公式计算提取液的叶绿素浓度(CV,µg·mL-1。Chla=12.7OD663-2.69OD645;Chlb=22.9OD645-4.86OD663;CV=Chla+Chlb。然后,按下式计算以单位叶面积表示的叶绿素含量(mg·dm-2:CA=CV1/1000×5×100/S=0.5CV/S。这里,CA和CV的下标A和V分...